高效液相色谱柱
怎样选择色谱柱?
现代高效液相色谱(HPLC)中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。
硅胶基质填料
正相色谱法
正相色谱法用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其它具有极性官能团,如氨基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(S-O)或其它极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组分最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱法使用的流动相的极性相对比固定相较低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform)、二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
反相色谱法
反相色谱法用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱的官能团。
反相色谱法所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙睛等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有较强的保留。
常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4Buy)、C6H5(Pheny)等。
聚合物填料
聚合物填料多以聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物或聚甲基丙烯酸酯等为基质,其主要优点是在H值为1~14均可使用。
相对于硅胶基质的填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,机械性能相对较低。
其它无机填料